Keresés


Toplista

Toplista
  • betöltés...

Magántanár kereső

Ha szívesen korrepetálnál, hozd létre magántanár profilodat itt.
Ha diák vagy és korrepetálásra van szükséged, akkor regisztrálj be és írd meg itt, hogy milyen tantárgyban!

Egy plazmid vektor EcoRI (G*AATTC) helyére akarnak építeni SmaI enzimmel (CCC*GGG) létrehozott DNS fragmentumokat.

91
Egy plazmid vektor EcoRI (G*AATTC) helyére akarnak építeni SmaI enzimmel (CCC*GGG) létrehozott DNS fragmentumokat.
b. Sikeresen elvégezve a kísérletet a létrejött plazmidok hasíthatók lesznek-e EcoRI és SmaI enzimmel? Ha igen, hány helyen?
c. Lesz-e különbség e tekintetben (hasítható vagy nem a létrejött molekula), ha SmaI helyett az AGG*CCT helyen hasító StuI enzimmel hozták létre a fragmentumokat?

Ennek a feladatnak mi az alapja?
Odáig jutottam, hogy van egy kiindulási tetszőleges dsDNS-em:

5' G * AATTC 3'
3' C * TTAAG 3'

és ebből lesznek DNS fragmentumok. Valamint ha pl nézem a CCC*GGG-t akkor ugyan így fel tudom írni, hogy mit hasított az enzim:

5' CCC * GGG 3'
3' GGG * CCC 5'

Ebből, hogy kapom meg, hogy milyen plazmidok keletkezhetnek?
Jelenleg 1 felhasználó nézi ezt a kérdést.
biológia, molekuláris, biokémia, dns, enzim, vektor, plazmid
0
Felsőoktatás / Biológia

Válaszok

1

A feladat lépéseit és a logikáját követve, itt van a részletes válasz a kérdésre:

Kiindulási plazmid hasítása EcoRI-val
EcoRI enzim hasítási helye:

5' - GAATTC - 3'
3' - CTTAAG - 5'

Amikor az EcoRI hasít, a következő túlnyúló végeket kapjuk:

5' - G AATTC - 3'
3' - CTTAA G - 5'

DNS fragmentumok előállítása SmaI enzimmel
SmaI enzim hasítási helye:

5' - CCCGGG - 3'
3' - GGGCCC - 5'

Amikor a SmaI hasít, a következő tompa végeket kapjuk:

5' - CCC GGG - 3'
3' - GGG CCC - 5'

b. EcoRI-val hasított plazmidba SmaI-val hasított fragmentum beépítése
Az EcoRI által létrehozott túlnyúló végek nem kompatibilisek a SmaI által létrehozott tompa végekkel. Az ilyen fragmentumokat nem lehet közvetlenül beilleszteni. De ha valahogy beillesztették (például további kezeléssel), akkor:

A beillesztett fragmentum mindkét vége tompa lesz.
Az új plazmidban nem lesz többé EcoRI hasítási hely (mivel az EcoRI által létrehozott túlnyúló végek el lesznek veszítve a beillesztés során).
A SmaI enzimnek sem lesz több hasítási helye, mivel a beillesztett fragmentum belsejében nincs másik SmaI hely.
Válasz: Az új plazmid nem hasítható EcoRI-val és SmaI-val.

c. DNS fragmentumok előállítása StuI enzimmel
StuI enzim hasítási helye:

5' - AGGCCT - 3'
3' - TCCGGA - 5'

Amikor a StuI hasít, a következő tompa végeket kapjuk:

5' - AGG CCT - 3'
3' - TCC GGA - 5'

A tompa végek kompatibilisek a SmaI tompa végeivel, de nem kompatibilisek az EcoRI túlnyúló végeivel.

Ha a StuI-val hasított DNS fragmentumokat valahogy beillesztjük az EcoRI-val hasított plazmidba:

Az új plazmidban nem lesz többé EcoRI hasítási hely.
Az új plazmidban nem lesz StuI hasítási hely.
Válasz: Az új plazmid nem hasítható EcoRI-val és StuI-val.

Összefoglalás
A feladat célja megérteni a DNS végek kompatibilitását és a restrikciós enzimek specifikus hasítási helyeit. Az EcoRI által létrehozott túlnyúló végek nem kompatibilisek a SmaI vagy StuI által létrehozott tompa végekkel. Emiatt az új plazmid nem lesz hasítható sem EcoRI, sem SmaI, sem StuI enzimmel, ha a beillesztést valahogy elvégezték.
0